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もうひとつ初学者的質問をさせてください。

あるウィルス属をouter primer set(sense A, antisense B)で増幅したのち、その中のウィルス種をinner primer set (sense A, antisense C)で検出する手順が文献にのっています。

属を検出することに興味がなくて種だけ検出したい場合は(sense A, antisense C)でいきなりPCRしてしまってもよいように思いますが、いかがでしょうか? antisense BとantisenseCは4ntほどかぶっています。

ちなみに1段階目はEx Taq polymeraseの存在下で50μLの反応物を35サイクル(94℃ 30秒 に最初のサイクルだけ2分追加、55℃で30秒、72℃で30秒、最終サイクルに7分追加)。2段階目は、先の2μLにPlaitnum taq polymeraseを加えて、25サイクル(94℃ 30秒、最初のサイクルだけ2分追加、55℃で30秒、72℃で30秒、最終サイクルに7分追加)とあります。

2段階を省略して1段階だけにできないものかどうか、ご指導お願いします。

質問日 Oct 03 at 18:38

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deer
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質問日: Oct 03 at 18:38

閲覧数: 59 回

最終更新日: Oct 03 at 18:38

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