http://qa.lifesciencedb.jp/questions/866/heminested-pcr%E3%81%AE%E7%9C%81%E7%95%A5<p>もうひとつ初学者的質問をさせてください。</p> <p>あるウィルス属をouter primer set(sense A, antisense B)で増幅したのち、その中のウィルス種をinner primer set (sense A, antisense C)で検出する手順が文献にのっています。</p> <p>属を検出することに興味がなくて種だけ検出したい場合は(sense A, antisense C)でいきなりPCRしてしまってもよいように思いますが、いかがでしょうか？　antisense BとantisenseCは４ntほどかぶっています。</p> <p>ちなみに1段階目はEx Taq polymeraseの存在下で50μLの反応物を35サイクル(94℃ 30秒　に最初のサイクルだけ2分追加、55℃で30秒、72℃で30秒、最終サイクルに7分追加）。2段階目は、先の2μLにPlaitnum taq polymeraseを加えて、25サイクル（94℃　30秒、最初のサイクルだけ2分追加、55℃で30秒、72℃で30秒、最終サイクルに7分追加）とあります。</p> <p>2段階を省略して1段階だけにできないものかどうか、ご指導お願いします。</p>jaMon, 22 May 2023 17:48:49 -0000